Kľúčový rozdiel - prietoková cytometria verzus FACS

V kontexte teórie buniek sú bunky základnou štrukturálnou a funkčnou jednotkou všetkých živých organizmov. Triedenie buniek je metodika, ktorá sa používa na oddelenie rôznych buniek podľa fyziologických a morfologických znakov. Môžu mať intracelulárne alebo extracelulárne vlastnosti. Interakcia DNA, RNA a proteínov sa považuje za intracelulárne interaktívne vlastnosti, zatiaľ čo tvar, veľkosť a rôzne povrchové proteíny sa považujú za extracelulárne vlastnosti. V modernej vede viedli metódy triedenia buniek k pomoci pri rôznych výskumoch v biologických štúdiách a tiež pri zavádzaní nových princípov prostredníctvom výskumu medicíny. Triedenie buniek sa uskutočňuje na rôznych metodikách, ktoré zahŕňajú primitívne s menším počtom zariadení, ako aj pokročilé technologické metodológie s použitím sofistikovaných prístrojov. Hlavnou použitou metodológiou je prietoková cytometria, fluorescenčné aktivované triedenie buniek (FACS), výber magnetických buniek a triedenie jednotlivých buniek. Prietoková cytometria a FACS sa vyvíjajú na diferenciáciu buniek podľa ich optických vlastností. FACS je špecializovaný typ prietokovej cytometrie. Prietoková cytometria je metodika, ktorá sa používa pri analýze heterogénnej populácie buniek podľa rôznych molekúl bunkového povrchu, veľkosti a objemu, čo umožňuje skúmanie jednotlivých buniek. FACS je proces, pri ktorom sa vzorková zmes buniek triedi podľa ich rozptylu svetla a fluorescenčných charakteristík do dvoch alebo viacerých nádob. Toto je kľúčový rozdiel medzi prietokovou cytometriou a FACS.

OBSAH

1. Prehľad a kľúčový rozdiel 2. Čo je to prietoková cytometria 3. Čo je FACS 4. Podobnosti medzi prietokovou cytometriou a FACS 5. Porovnanie bok po boku - prietoková cytometria vs FACS v tabuľkovej forme 6. Zhrnutie

Čo je to prietoková cytometria?

Prietoková cytometria je metóda, ktorá sa používa na skúmanie a určovanie expresie intracelulárnych molekúl a bunkového povrchu a na definovanie a charakterizáciu rôznych typov buniek. Používa sa tiež na stanovenie objemu buniek a veľkosti buniek a na vyhodnotenie čistoty izolovaných subpopulácií. To umožňuje viacparametrové vyhodnotenie jednotlivých buniek približne v rovnakom čase. Prietoková cytometria sa používa na meranie intenzity fluorescencie, ktorá je produkovaná fluorescenčne značenými protilátkami, ktoré pomáhajú identifikovať proteíny alebo ligandy, ktoré sa viažu na pridružené bunky.

Prietoková cytometria obvykle zahŕňa hlavne tri podsystémy. Sú to tekutina, elektronika a optika. Pri prietokovej cytometrii je k dispozícii päť hlavných komponentov, ktoré sa používajú pri triedení buniek. Ide o prietokovú komoru (prúd tekutiny, ktorý sa používa na ich transport a zarovnanie do buniek pre proces optického snímania), systém merania (môže byť z rôznych systémov vrátane ortuťových a xenónových žiaroviek, vysoko výkonného vodou chladeného alebo nízkoenergetické vzduchom chladené lasery alebo diódové lasery), ADC; Systém analógového na digitálny prevodník, zosilňovací systém a počítač na analýzu. Získanie je proces, ktorým sa údaje zbierajú zo vzoriek pomocou prietokového cytometra. Tento proces je sprostredkovaný počítačom, ktorý je spojený s prietokovým cytometrom. Softvér prítomný v počítači analyzuje informácie privádzané do počítača z prietokového cytometra. Tento softvér má tiež schopnosť upravovať parametre experimentu, ktorý riadi prietokový cytometer.

Čo je FACS?

V kontexte prietokovej cytometrie je fluorescenčné aktivované triedenie buniek (FACS) metódou, ktorá sa používa na diferenciáciu a triedenie vzorky zmesi biologických buniek. Bunky sa oddelia od dvoch alebo viacerých nádob. Metóda triedenia je založená na fyzikálnych vlastnostiach bunky, ktorá zahŕňa rozptyl svetla a fluorescenčné charakteristiky bunky. Toto je dôležitá vedecká technika, ktorú je možné využiť na získanie spoľahlivých kvantitatívnych a kvalitatívnych výsledkov fluorescenčných signálov, ktoré sú emitované z každej bunky. Počas FACS sa spočiatku získa vopred získaná zmes buniek; suspenzia je nasmerovaná do stredu úzkeho prúdu tekutiny, ktorý tečie rýchlo. Prúd kvapaliny je určený na oddelenie buniek v suspenzii na základe priemeru každej bunky. Na prúd suspenzie sa aplikuje vibračný mechanizmus, ktorý vedie k tvorbe jednotlivých kvapiek.

Systém je kalibrovaný, aby sa vytvorila jedna kvapka s jednou bunkou. Tesne pred tvorbou kvapiek sa suspenzia toku pohybuje pozdĺž zariadenia na meranie fluorescencie, ktoré deteguje fluorescenčnú charakteristiku každej bunky. V mieste vzniku kvapiek sa umiestni elektrický nabíjací prstenec, ktorý sa pred meraním intenzity fluorescencie indukuje náboj. Keď sa kvapky vytvoria z prúdu suspenzie, v kvapkách sa zachytí náboj, ktorý potom vstúpi do elektrostatického vychyľovacieho systému. Podľa náboja systém presmeruje kvapky do rôznych nádob. Spôsob aplikácie náboja sa líši podľa rôznych systémov používaných vo FACS. Zariadenie používané v FACS je známe ako triedič buniek aktivovaný fluorescenciou.

Aká je podobnosť medzi prietokovou cytometriou a FACS?


  • Prietoková cytometria a FACS sa vyvíjajú na diferenciáciu buniek podľa ich optických vlastností.

Aký je rozdiel medzi prietokovou cytometriou a FACS?

Zhrnutie - prietoková cytometria vs FACS

Bunka je základnou štrukturálnou a funkčnou jednotkou všetkých živých organizmov. Triedenie buniek je proces, ktorým sa bunky izolujú a diferencujú do rôznych kategórií na základe ich intracelulárnych a extracelulárnych vlastností. Prietoková cytometria a FACS sú dve dôležité metodiky pri triedení buniek. Oba procesy sú vyvinuté na rozlíšenie buniek podľa ich optických vlastností. Prietoková cytometria je metodika, ktorá sa používa pri analýze heterogénnej populácie buniek podľa rôznych molekúl bunkového povrchu, veľkosti a objemu, čo umožňuje skúmanie jednotlivých buniek. FACS je proces, pri ktorom sa vzorková zmes buniek triedi podľa ich rozptylu svetla a fluorescenčných charakteristík do dvoch alebo viacerých nádob. Toto je rozdiel medzi prietokovou cytometriou a FACS.

Stiahnite si verziu PDF Flow Flow Cytometry vs FACS

Môžete si stiahnuť verziu tohto článku vo formáte PDF a použiť ju na účely offline podľa citácie. Stiahnite si PDF verziu tu Rozdiel medzi prietokovou cytometriou a FACS

referencie:

  1. Prietoková cytometria (FCM) / FACS Triedenie buniek aktivované fluorescenciou (FACS). Prístup k 22. septembru 2017. K dispozícii tu Ibrahim, Sherrif F. a Ger van den Engh. „Prietoková cytometria a triedenie buniek.“ SpringerLink, Springer, Berlín, Heidelberg, 1. januára 1970.. Prístup k 22. septembru 2017. K dispozícii tu

S láskavým dovolením:


  1. 'Cytometer'By Kierano - Vlastná práca, (CC BY 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia' Fluorescenčné triedenie buniek (FACS) B'By SariSabban - Sabban, Sari (2011) Vývoj modelového systému in vitro na štúdium interakcie Equus caballus IgE s vysokoafinitným receptorom FcεRI (dizertačná práca), University of Sheffield, (CC BY-SA 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia